中國科大突破性實現小鼠全身"高清全景成像", 繪制周圍神經亞細胞級圖譜
中國科學技術大學合肥微尺度物質科學國家研究中心和生命科學與醫學部畢國強、劉北明教授聯合合肥綜合性國家科學中心人工智能研究院、中國科學院深圳先進技術研究院團隊，在大尺度生物組織三維顯微成像領域取得重大突破，成功開發世界最快的小動物全身亞細胞級高清三維成像技術，實現周圍神經系統精細地圖的高效繪制。相關成果以“High-speed mapping of whole-mouse peripheral nerves at subcellular resolution”為題于北京時間7月10日發表在《細胞》（Cell）上。
小鼠全身周圍神經結構三維可視化
周圍神經系統作為人體的"物聯網"，承載著大腦與全身器官的雙向通訊與調控：既傳遞運動指令、調控呼吸心跳等關鍵功能，又將痛覺、溫度等感知信號實時回傳處理，實現生理功能中各組織器官活動的高效協同。繪制周圍神經系統遍布全身的精細連接圖譜，是從根本上理解其復雜功能機制和相關疾病機理的必由之路。
長期以來，科學家對周圍神經系統整體構架的認知一直依賴于毫米級分辨率的解剖學研究。近十年來，三維光學顯微技術的進步推動了微米級分辨率的全腦介觀神經圖譜解析，但對全身周圍神經系統的研究仍面臨技術瓶頸。現有前沿成像難以兼顧成像分辨率和成像速度，即便結合全身樣品透明化處理技術，仍難在小鼠全身尺度以亞細胞分辨率解析周圍神經系統復雜的長程神經通路結構。
研究團隊此前開發了新型同步飛掃技術（VISoR），對大體積生物樣品進行厚切片和透明化處理后進行三維顯微成像。VISoR兼具高速、高分辨率和可擴展性，實現了1.5小時內完成小鼠全腦樣品的亞微米分辨成像（王浩、祝清源等，《國家科學評論》, 2019），并在進一步優化后首次實現了獼猴全腦亞細胞分辨率三維成像和單神經纖維追蹤（徐放、沈燕、丁露鋒、楊朝宇等，《自然·生物技術》, 2021）。然而，這種先切片后透明化成像的全腦成像策略不適用于小鼠全身樣品。相較于相對致密均質的大腦，小鼠全身異質性高，包含多樣組織類型和不規則結構，切片過程中極易造成組織離散和丟失，導致難以完整重構。
針對這一技術難題，團隊提出“樣品原位切片+切面三維成像”的策略，研發了整合精密振動切片裝置的blockface-VISoR成像系統，以及相應的小鼠全身透明化和水凝膠包埋的樣品制備流程ARCHmap。每次成像僅采集樣品塊表面約600微米深度的三維圖像，然后自動切掉400微米厚度樣品，循環往復直至樣品成像完畢。隨后，通過自動化拼接算法對相鄰切片約200微米的重疊區域進行三維無縫拼接重構。由于每次掃描成像深度僅數百微米，透明化組織光散射效應較小，因此可以實現較高分辨率。基于此策略，研究人員建立了優化的技術流程，實現了在40小時內完成成年小鼠全身均一亞細胞分辨率三維成像，獲取單通道約70 TB原始圖像數據。目前已累計采集數十只小鼠超過4 PB原始圖像數據集。
Blockface-VISoR成像系統
由于該樣品制備方法具備高熒光保存性的優勢，研究人員驗證了該技術兼容神經科學領域常用的轉基因和嗜神經病毒攜帶的熒光蛋白，以及免疫熒光等標記方法。結合上述標記和成像技術，研究人員解析了小鼠全身不同類型周圍神經的精細結構和單纖維投射路徑，首次發現單個脊神經元的跨節段投射特征，闡明了全身交感神經的器官特異性伴血管分布模式，并解析了迷走神經的整體投射構架和單纖維復雜投射路徑。
小鼠全身透明化blockface-VISoR成像流程與周圍神經介觀連接結構解析
研究人員介紹，這項突破性的技術不僅有助于建立周圍神經連接圖譜研究的新范式、解決神經調控相關基礎性問題，在發育生物學、系統解剖學和生物醫藥等領域也有重要應用前景。此外，該技術仍存在改進和優化空間，下一步將通過使用雙相機或多相機成像進行多通道圖像同時采集，提高數據采集效率，并探索其在其他更大尺度生物樣品成像領域中的應用。
導師與團隊成員討論
《細胞》期刊審稿人高度評價這項工作，提到“這些分析在群體和單細胞層面均產生了驚人的精細數據。尤為重要的是，這項初步探索就揭示了全新的洞見”（原文：These analyses produced strikingly detailed data at both the population and single-cell levels. Importantly, new insights emerged from this initial exploration），“這是一項有趣的研究，展示精美，其方法學呈現出巨大的潛力”（原文：This is an interesting work, beautifully illustrated, and the methodology shows great potential）。
中國科大特任副研究員時美玉、博士生姚雨辰和王淼、碩士生楊琦為論文共同第一作者，畢國強教授為通訊作者，徐程特任副研究員、劉北明教授和祝清源高級工程師為共同通訊作者。中國科學技術大學為本項工作的第一完成單位，合肥綜合性國家科學中心人工智能研究和中國科學院深圳先進技術研究院分別為第二和第三完成單位。該工作還得到了安徽大學屈磊教授、中國科學院深圳先進技術研究院徐富強教授、新西蘭奧塔哥大學張銘教授和Yusuf Ozgur Cakmak教授的合作和支持。此外，該研究獲得國家重點研發計劃、國家自然科學基金、科技創新2030-“腦科學與類腦研究”重大項目、中國科學院戰略性先導科技專項、中國科大青年創新基金和安徽省自然科學基金等基金的資助。
論文鏈接：https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(25)00673-7
實驗技術和示范數據集鏈接：https://mesoanatomy.org/mesomouse/
（合肥微尺度物質科學國家研究中心、生命科學與醫學部、科研部）
本文鏈接：http://knowith.com/news-3-3255.html中國科大突破性實現小鼠全身"高清全景成像", 繪制周圍神經亞細胞級圖譜
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